VIH/ SIDA

Nombre y finalidad de uso:

Abbot determine HIV-1/2 es un inmunoanalisis cualitativo invitro de lectura visual para la detección de anticuerpos frente a los virus VIH-1 y VIH-2 en suero, plasma o sangre.

La muestra se añade en la superficie absorbente, mientras la muestra pasa el área del conjugado, lo reconstituye y se muestra con el conjugado de coloide de selenio-antígenos. Esta mezcla se mueve por la fase solida hasta llegar a los antígenos recombinantes y péptidos sintéticos inmovilizados en la ventana de resultados del paciente.

Procedimiento del ensayo.

1.      Retire el plastico de protección de los ensayos

2.      Para muestras de suero o plasma

a)      Dispense 50 micro litros de muestra (con una pipeta de precisión) en la superficie absorbente (señalada con una flecha)

b)     Espere  entre un mínimo de 15 minutos y un máximo de 60 minutos para leer el resultado

3.      Para muestras de sangre (venopuncion)

a)      Dispense 50 microlitros de muestra (con una pipeta de precisión) en la superficie absorbente (señalada con una flecha)

b)     Espere un minuto y dispense una  gota de tampón de arrastre en la superficie absorbente

c)      espere entre un mínimo de 15 minutos y un máximo de 60 minutos para leer el resultado

4.      para muestras de sangre (punción digital)

a)      Dispense 50 microlitros de muestra (con un tubo capilar de EDTA) en la superficie absorbente  (señalada con una flecha)

b)     Espere hasta que la sangre impregne totalmente la superficie absorbente y a continuación, dispense una gota de tampón de arrastre en la superficie absorbente.

c)      Espere  entre un mínimo de 15 minutos y un máximo de 60 minutos para leer el resultado

Interpretación de resultados:

Positivo (2barras): tanto en la ventana de control como en la ventana de resultados del paciente aparecen barras rojas. Cualquier tipo de tonalidad roja que pueda aparecer en la ventana de resultados del paciente indica que el resultado es positivo

Negativo (1 barra): en la  ventana de control aparece un abarra roja y en la ventana de resultados del paciente no aparece nada.

No valido (ninguna barra): si no aparece una barra en la ventana de control del ensayo, aunque haya aparecido una ventana roja en el de resultados del paciente .

·         El resultado del ensyo es positivo aunque el tono de la barra de ventana de resultados sea mas claro o mas obsuro que el de barra de control

·         Si obtiene repetidamente un resultado no valido.

RETRACCIÓN DEL COAGULO.

OBJETIVO: Puesto que el coagulo de fibrina encierra los elementos organizados (celulares) de la sangre (in vitro e in vivo) el volumen de glóbulos rojos establece el límite inferior de la retracción de la fibrina. Por lo tanto, siendo normales los demás factores, el coagulo se retrae tanto más cuanto menor es el hematocrito. La retracción es directamente proporcional al número de plaquetas, e inversamente al hematocrito. Cuando las fibrinolinas son muy activas la fibrina puede disolverse casi tan rápidamente como se forma, y la retracción del coagulo se modifica en los trastornos de este tipo: choque, quemaduras, etc.

Mide la cantidad de fibrina formada y su retracción; así como al número de función de las plaquetas, pues poseen una proteína similar a la actomiosina, que produce la retracción del coagulo.

MATERIAL

*Tubos de ensaye para centrífuga

*Alambre de 1mm. de grosor

*Baño María de 37°C

*Equipo de venopuncion

TÉCNICA

1.       Se pone en un tubo de centrifuga graduado de 5ml. de sangre venosa recién obtenida. Se lleva el alambre al fondo del tubo.

2.       Se pone el tubo en el alambre, de un baño de agua a 37° en donde se deja 1 hora después de la formación del coágulo sin tocarlo.

3.       Se saca el alambre cuidadosamente y se deja escurrir dentro del tubo el coágulo unido al alambre durante 1 a 2 minutos.

4.       Se lee el volumen del líquido que quedo en el tubo. El resultado se expresa como un porcentaje del volumen inicial de 5ml.

Ejemplo: Si después de la coagulación 5ml. de sangre suministraron 3ml. de líquido.

La retracción es de:  3x100 ÷5 = 60 por ciento

VALORES NORMALES                                           

Entre 48 y 64 por ciento.

RESULTADOS

1.       2.5 ml.   2.5x100÷4= 250÷4 = 62.5%

2.       3ml.   3x100÷5 = 300÷5 = 60%

PRUEBA DE RUMPEL - LEEDE

También llamada Prueba del lazo o torniquete, consiste en mantener elevada la presión en un miembro por un periodo de 5 minutos, con un lazo o el manguito inflable del  Tensiómetro como para medir la T.A y comprimirlo con una presión menor que la sistólica pero mayor que la diastólica para producir estasis sanguínea en las vénulas y capilares.

MATERIAL A ESTUDIAR: observación de la piel luego de interrumpir la circulación venosa. Se realiza el recuento de petequias (pequeñas manchas hemorrágicas en un círculo de 5 cm de diámetro) normalmente no se debe producir más de 5 petequias por debajo de la compresión, especialmente en la cara palmar del antebrazo próxima al manguito neumático. Más de diez petequias, y sobre todo extendidas más allá del cuarto superior del antebrazo es patológico.

TIEMPO INSUMIDO AL PACIENTE: 5 a 10 minutos.

FINALIDAD: determinar la fragilidad de las paredes capilares, estimar la tendencia a la hemorragia. Ayuda a reconocer la trombocitopenia.

PREPARACION PREVIA: no es necesaria. No repetir en el mismo miembro antes de los 7 días.

RESULTADOS: aparición de 5 petequias.

VALORES NORMALES: ninguna petequia o hasta diez petequias en un área de 5 cm. Escala para informar el número de petequias.

0 a 10: 1+

10 a 20: 2+

20 a 50: 3+

50 o más petequias: 4+

VALORES AUMNETADOS: pueden indicar coagulación intravascular difusa,  disminución de fibrinógeno, disminución de protrombina, deficiencia de factor VII, trombocitopenia, tromboastenia, enfermedad de Von Willebrand, deficiencia de vitamina K. y puede estar asociado a afecciones no relacionadas con los trastornos de coagulación como: escarlatina, hipertensión, diabetes, gripe, sarampión, escorbuto.

También es anormal la prueba de las trombopatías quizá debido a  que por falla plaquetaria no hay vasoconstricción adecuada ni formación de trombo blanco.

CONFIABILIDAD DE LOS RESULTADOS: buena.

MEDICAMENTOS QUE PUEDEN ALTERAR LOS RESULTADOS: Corticoesteroides.

TIEMPO DE SANGRADO.

TIEMPO DE SANGRADO

OBJETIVO:

Que al término de la practica realice el tiempo de sangrado por cualquiera de los 2 métodos existentes.

INTRODUCCIÓN:

Un tiempo de sangrado normal indica una retracción normal de los capilares y la existencia de un número suficiente de plaquetas, con actividad normal.

La metamorfosis viscosa normal depende de un buen mecanismo extrínseco de producción de tromboplastina, por lo tanto, el tiempo de sangrado se alarga en la insuficiencia del factor VII. El tiempo de sangrado aumenta en forma característica en la purpura trombocitopenia.

METODOLOGÍA:

Se utilizara el “Método de Duke”

MATERIAL:

Lanceta estéril.

Torundas alcoholadas.

Reloj cronometro.

Papel filtro.

TÉCNICA:

1.- con una lanceta estéril, se practica en el borde inferior del lóbulo de la oreja una punción de 3mm. De profundidad, se pone en marcha el cronometro.

2.- a intervalos de medio minuto, se aplica cuidadosamente sobre la gota de la sangre el borde de un pequeño disco de papel filtro, cuidando de no tocar la piel. Esta maniobra por objeto es impedir que se forme un coagulo en la gota de sangre sobre la herida, pues los tiempos de sangrado resultaran anormalmente bajos.

3.-  utilizando una nueva zona de papel filtro para cada secado de medio minuto, puede tenerse un registro conveniente del tiempo total (tiempo en minutos = número de gotas divididas entre 2) se forma como punto final al momento en el cual el papel filtro ya no absorbe sangre.

TIEMPO DE SANGRADO NORMAL CON EL MÉTODO DE DUKE.

De 1 a 3 min (sin embargo, puede ser a veces hasta 5 min en sujetos normales).

MÉTODO DE IVY

1.- se coloca alrededor del brazo un maguillo de esfigmómetro con el cual se ejerce una presión de 40 mm/Hg. Que aquel durante toda la prueba.

2.- utilizando una lanceta estéril se hace a intervalos cortos (entre 2.5 y 3.0 mm de profundidad). A lo largo de la cara flexora (interna) el ante brazo, evitando las venas visibles. Se pone en marcha el cronometro.

3.- a intervalos de medio minuto, utilizando papel filtro se seca cuidadosamente cada gota de sangre en la misma forma que para el método de DUKE, el punto final es el mismo.

Tiempo normal de sangrado en el método de IVY

Entre 2 y 6 min. (Max de 7 min).

NOTA:

El tiempo de sangrado representa sencilla y útil (aunque algo imprecisa) de la eficacia de las funciones capilares y de plaquetas en la hemostasia. Es preferible el método de IVY  al de DUKE, pues las condiciones son más constantes y se realizan en realidad 3 pruebas.

       

   

ROSA DE BENGALA.

Antígeno Brucelar Amortiguado para el

Diagnóstico de Brucelosis

Introducción

Es una  prueba, basada en la aglutinación como respuesta a la presencia de alguna de las aglutininas de Brucella (abortus, mellitensis y suis). Bacterias causantes de la Brucelosis, organismos virulentos e infecciosos para el hombre que adquiere generalmente por vía mucocutánea, por consumir carne contaminada con la bacteria, abrasiones o cortes en la piel, inhalación de aerosol o contaminación de la conjuntiva; invadiendo el sistema linfático y puede alcanzar a diversos órganos.

Por ello se realiza la prueba de Rosa de Bengala por ser una prueba sensible y rápida que permite una aproximación diagnóstica inmediata.se empela sobre todo en las zonas no endémicas, como método de "despistaje". Emplea como antígeno una suspensión bacteriana a la que se ha añadido el colorante rosa de bengala, enfrentándola al suero sin diluir del enfermo.

Desarrollo

 Material

§  Placa cóncava

§  Puntillas

§  Cronómetro

Equipo

§  Pipeta semiautomática

§  Microscopio

Muestra

§  Suero

(Obtener 3 ml. de sangre por punción venosa, centrifugar y separar el suero)

Reactivo

§  Antígeno Rosa de Bengala

§  Control Positivo de Brucella

§   Control Negativo de Brucella

Procedimiento

1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo, controles y muestras de suero.

2. Utilizando la pipeta automática adicione 30 μL de la muestra del paciente en un círculo de la placa.

3. Mezcle suavemente el Antígeno Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogéneo, después  coloque 30 μL en la placa de prueba, en el mismo círculo donde se colocó la muestra del paciente, mezcle ambas con un aplicador. (Usar un aplicador diferente para cada muestra). Repita este paso para cada muestra de paciente y controles.

4. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos.

5. Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado.

 Nota: Después de este tiempo(4 min.) la lectura ya no es válida.

Resultado e interpretación

La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se comenzó a mezclar

Es el tiempo límite óptimo para la observación de ciertas aglutininas que se revelan lentamente puesto que se pueden presentar reacciones no específicas.

			Valores de referencia
Paciente 1	Negativo		CONTROL POSITIVO Presencia de aglutinación indica la existencia de anticuerpos específicos.
Paciente 2	Negativo		CONTROL NEGATIVO Ausencia de aglutinación.

Ambos resultados fueron negativos lo que indica que los pacientes no tienes Brucelosis o no han estado en contacto con la bacteria indicada.

Se pueden presentar falsos negativos, que se limitan a enfermos con procesos de pocos días de evolución y a algunos casos de enfermedad de curso muy prolongado.

NOTA: El aislamiento del agente etiológico mediante hemocultivos es de suma importancia.

Conclusiones

Esta prueba cualitativa de Rosa de Bengala es un método considerado eficaz en el diagnóstico de brucelosis, que permite dar al paciente un tratamiento en caso de que sea positivo el resultado, sin embargo por tratarse de una prueba cualitativa se debe comprobar con algunas otras como: Aglutinación Lenta Estándar o Aglutinación Lenta en Presencia de 2-Mercaptoetanol.

VDRL.

Práctica 3. VDRL 

Antígeno de cardiolipina para investigar reaginas de la sífilis en Suero sin inactivar, en Plasma y L. C. R. (no requiere reconstitución)

Agente de Diagnóstico

Introducción

Treponema pallidum, la bacteria que causa la sífilis, una enfermedad que generalmente se transmite por vía sexual.

Su diagnóstico puede ser serológico, con lo que se pueden determinar dos clases de anticuerpos:

1.    Tipo “cardiolipina”.- No treponema e inespecíficos

2.    Antitreponemas específicos

La prueba realizada Venereal Disease Research Laboratory VDRL se le conoce como una prueba para sífilis no-treponémica. Es parte de la exploración inicial de la sífilis e iniciar un tratamiento. Con  el método cualitativo empleando la  placa presenta floculación, si se presenta el caso se lleva a cabo el método cuantitativo con el o los sueros positivos.

También se emplea en el cuidado prenatal del embarazo, así como parte de los estudios de laboratorio prenatales.

Desarrollo

Material

§  Placa cóncava

§  Puntillas

§  Aguja No. 21 sin bisel

§  Cronómetro

Equipo

§  Pipeta semiautomática

§  Microscopio

Muestra

§  Suero

(Obtener 3 ml. de sangre por punción venosa, centrifugar y separar el suero)

Reactivo

§  Antígeno VDRL y los Sueros de Controles (almacenados 2-8°C)

Resultado e interpretación

Método cualitativo
1. Depositar 0.05 ml. de suero problema en un anillo de la placa cóncava.
2. En otro anillo colocar una gota de suero control positivo y en el anillo siguiente una gota
de suero control negativo, extendiendo dentro de los mismos.
3. Añadir una gota del antígeno en suspensión previamente resuspendido en cada muestra
con la aguja N.21
4. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm durante 4 min.
 (Nota: lo realizamos de forma manual a falta de agitador).
Las pruebas que se realizan en un clima extremadamente seco pueden evaporarse, por lo tanto
la paca se cubre con la tapa de una caja Petri humedecida.

			Valores de referencia
Paciente 1	Negativo		CONTROL POSITIVO Presencia de floculación mediana o grande
Paciente 2	Negativo		CONTROL NEGATIVO Ausencia de floculación

En este caso ambos resultados son negativos lo que indica que ningún paciente tiene sífilis.

El examen con resultado positivo puede indicar que usted tiene sífilis. Si el examen es positivo, el siguiente paso es confirmar los resultados con examen FTA-ABS, que es un examen más específico para la sífilis.

La capacidad del examen VDRL para detectar sífilis depende de la etapa de la enfermedad. La sensibilidad del examen para detectar la sífilis se acerca al 100% durante las etapas intermedias y es menos sensible durante las etapas más tempranas y tardías.

Las siguientes afecciones pueden provocar un examen falso positivo, como:

·  VIH

·  Enfermedad de Lyme

·  Ciertos tipos de neumonía

·  Malaria

·  Lupus eritematoso sistémico

El siguiente método lo incluí sin embargo por falta de sueros problema positivos en el método cualitativo no se realizó.

Método cuantitativo

1. Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa.

2. Colocar en una gradilla 6 tubos y numerarlos.

3. Agregar a cada uno 0.5 ml. de solución salina al 9%.

4. Depositar 0.5 ml. de suero al tubo 1 y mezclar.

5. Pasar 0.5 ml. del tubo 1 al tubo 2 mezclar.

6. Pasar 0.5 ml. del tubo 2 al tubo 3 mezclar

7. Continuar con este proceso hasta el tubo 6.

8. Depositar 0.05 ml. de cada una de las diluciones sobre los diferentes anillos de la placa
cóncava.

9. Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado (VDRL) utilizando la aguja No.21 sin
bisel a cada dilución.

10. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm. Durante 4 min.

11. Leer al microscopio con objetivo seco débil 10x.

Resultados e interpretación

El título del suero problema será la última dilución que presente un resultado positivo. Ejemplo:

Si se presenta floculación hasta el tubo 3 – dilución 1:8, por lo tanto el título será 1:8.

Nota:
1.Sueros extremadamente turbios o hemolizados son insatisfactorios para la prueba.
2. Sueros débiles positivos y fuertes evidencias clínicas de la enfermedad es conveniente 
efectuar la prueba cuantitativa, ya que ocasionalmente pueden presentar el fenómeno de 
prozona.
3. Si la lectura del resultado no se realiza inmediatamente después de los 4 min. puede secarse
la reacción y dificultad en la interpretación.
4. El antígeno en suspensión debe estar a temperatura ambiente antes de ser utilizado.

Conclusiones

Esta prueba cualitativa VDRL nos permite identificar a los pacientes con sífilis, enfermedad producida por la bacteria Treponema pallidum; se trata de una prueba rápida y certera que permite el inicio de un tratamiento eficaz evitando que avance y pueda ser controlada satisfactoriamente. En caso de que los resultados sean positivos es necesario comprobar con la Prueba Rápida de Regina  (RPR) y examen FTA-ABS, que son aun más exactas.